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蜘蛛以昆虫、其他蜘蛛、多足类为食。跳蛛视力佳，能在5或10公尺内潜近捕获物，猛扑过去。蟹蛛在与其体色相近的花上等候猎物。穴居在土中的地蛛筑衬以丝的地穴，洞口有夜间打开的活盖，捕食从洞口经过的昆虫。

漏斗蛛织一张平网，昆虫落网即引起振动；蜘蛛本身居於丝管内，末端窄而通入植物丛或石缝中。大多数圆蛛用最少的丝织成面积最大的网，网像一个空中滤器，陷捕未看见细丝的、飞行力不强的昆虫。网虽复杂，但一般在1小时内即能织成，多在天亮前完成。若网於捕食时破坏，则另织一新网。蜘蛛自身为什麼不被网黏住，以及在织网时如何切断弹力极强的丝，这些问题迄今尚未完全了解。织圆网时，蜘蛛放出一丝，随风飘汤。

如果丝的游离端未能黏在某物上，则蜘蛛把丝拉回吃掉。若该丝牢固地黏在某物(如树枝)上，则蜘蛛从该丝桥上通过，再以丝把它加固。蜘蛛在桥的中央固著一丝，自身坠在一条丝上往下垂，到地面上或另一树枝上，把此丝黏著。蜘蛛回到中心，拉多根从网中心向四周辐射的辐射丝。然後，蜘蛛爬回网中心，从里向外用乾丝拉临时的螺旋丝，各圈螺旋丝之间间距较大。然後蜘蛛爬到最外围，自外向网中心安置带黏性的较紧密的捕虫螺旋丝。一边结，一边把先前结的不带黏性的乾螺旋丝吃掉。

网全部完工後，有的蜘蛛从网中心拉一根丝(信号丝)爬到网的一角的树叶中隐蔽起来。若有昆虫投网，透过信号丝的振动便可闻讯而来取食。有的蜘蛛头朝下留在网中心，等候猎物，有猎物时先用丝将其缠绕，再叮咬之并将其携回网中心或隐蔽处进食或贮藏。蝶蛾类较大，易於逃脱，故先叮咬後用丝捆缚。有的蜘蛛结共用网，如加彭的社会漏斗蛛(Agelenaconsociata)筑一大网，几百只蜘蛛共同捕食。蜘蛛在控制某些昆虫的种群上可能起重要的作用。有几种毒蛛的神经毒对人有毒性。织网过程引起科学上的兴趣，并已用於研究影响神经系统的药物(用药後蜘蛛所织的网异於平常)。

以生活及捕食方式可以大致分成:结网性蜘蛛和徘徊性蜘蛛。

结网性蜘蛛的最主要特征是它的结网行为。蜘蛛通过丝囊尖端的突起分泌粘液，这种粘液一遇空气即可凝成很细的丝。以丝结成的网具有高度的粘性，是蜘蛛的主要捕食手段。对粘上网的昆虫，蜘蛛会先对猎物注入了一种特殊的液体枣消化酶。这种消化酶能使昆虫昏迷、抽搐、直至死亡，并使肌体发生液化，液化后蜘蛛以吮吸的方式进食。蜘蛛是卵生的，大部分雄性蜘蛛在与雌性蜘蛛交配后会被雌性蜘蛛吞噬，成为母蜘蛛的食物。

徘徊性蜘蛛则不会结网，而是四处游走或者就地伪装来捕食猎物，如高脚蜘蛛，即台湾俗称的（虫拿）（虫额）。

有的蜘蛛可以用网做成一个汽球，随风飘行到别的地方。

蜘蛛对人类而言，并非席上的食物，甚至惧而远之，鲁迅说过：“第一个吃螃蟹的人是很可佩服的，不是勇士谁敢去吃它呢？螃蟹有人吃，蜘蛛也一定有人吃过。不过不好吃，所以后人便不吃了”（《春的两种感想》）但近来有一些地区如柬埔寨素昆地区是以贩卖蜘蛛为菜肴。

蜘蛛主要捕食小昆虫。水边的狼蛛能捕食小鱼虾，捕鸟蛛能捕鸟（据说，但无确切文献记载），南美一种体长7.5厘米的蜘蛛甚至能捕食小响尾蛇。结网蜘蛛则以网捕食。