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蜘蛛体长从0.05毫米到60毫米不等。身体分头胸部和腹部。部分种类头胸部背面有胸甲（有的没有），头胸部前端通常有8个单眼（也有6个、4个、2个、0个的），排成2～4行。腹面有一片大的胸板，胸板前方两个额叶中间有下唇。腹部不分节，腹柄由第1腹节（第7体节）演变而来。

腹部多为圆形或卵圆形，有的具各种突起，形状奇特。腹部腹面纺器由附肢演变而来，少数原始的种类有8个，位置稍靠前；大多数种类6个纺器，位于体后端肛门的前方；还有部分种类具4个纺器，纺器上有许多纺管，内连各种丝腺，由纺管纺出丝。感觉器官有眼、各种感觉毛、听毛、琴形器和跗节器。

蜘蛛体外被几丁质外骨骼，身体明显地分为头胸部及腹部，二者之间往往有腹部第一腹节变成的细柄相连接，无尾节或尾鞭。蜘蛛无复眼，头胸部有附肢6对，第一、二对属头部附肢，其中第一对为螯肢多为2节，基部膨大部分为螯节，端部尖细部分为螯牙，牙为管状，螯节内或头胸部内有毒腺，其分泌的毒液即由此导出。第二对附肢称为脚须，形如步足，但只具6节，基节近口部形成颚状突起，可助摄食，雌蛛末节无大变化，而雄蛛脚须末节则特化为生殖辅助器官，具有储精、传精结构，称触肢器。第三至六对附肢为步足，由7节组成，末端有爪，爪下还有硬毛一丛，故适于在光滑的物体上爬行。

蜘蛛大部分都有毒腺，螯肢和螯爪的活动方式有两种类型，穴居蜘蛛大多都是上下活动，在地面游猎和空中结网的蜘蛛，则如钳子一般的横扫。

无触角，无翅，无复眼，只有单眼，一般有8个眼，但亦有6、4、2眼者，个别属甚至没有眼，就眼的色泽和功能而言，又分夜和昼两种。

蜘蛛的口器，由螯肢、触肢茎节的颚叶，上唇、下唇所组成，具有毒杀、捕捉、压碎食物，吮吸液汁的功能。

有些蜘蛛的跗节爪下，有由粘毛组成的毛簇，毛簇有使蜘蛛在垂直的光滑物体上爬行的能力。结网的蜘蛛，跗节近顶端有几根爪状的刺，称为副爪。

大多数蜘蛛的腹部不分节。有无外雌器(称生殖厣)是鉴定雌体种的重要特征。在腹部腹面中间或腹面后端具有特殊的纺绩器，三对纺绩器按其着生位置，称为前、中、后纺绩器，纺绩器的顶端有膜质的纺管，周围被毛，不同蜘蛛的纺管数目不同，不同形状的纺管，纺出不同的蛛丝，纺管的筛器，也是纺丝器官，像隆头蛛科的线纹帽头蛛的筛器上有9600个纺管，可见其纺出的丝是极其纤细的。经由纺管引出体外的丝腺有8种，丝腺的大小及数目随蜘蛛的成长和逐次蜕皮而增加。蜘蛛丝是一种骨蛋白，十分粘细坚韧而具弹性，吐出后遇空气而变硬。

雌雄异体，雄体小于雌体，雄体触肢跗节发育成为触肢器，雌体于最后一次蜕皮后具有外雌器。